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dc.contributor.advisor | Barba León Jeannette | |
dc.contributor.author | Orozco García Adriana Guadalupe | |
dc.contributor.editor | Centro universitario de Ciencias Biológicas y Agropecuarias | |
dc.contributor.editor | Universidad de Guadalajara | |
dc.contributor.other | Maestría en Ciencias en Biosistemática y Manejo de Recursos de Naturales y Agrícolas | |
dc.date.accessioned | 2020-07-23T06:10:45Z | |
dc.date.available | 2020-07-23T06:10:45Z | |
dc.date.issued | 2017 | |
dc.identifier.uri | http://repositorio.cucba.udg.mx:8080/xmlui/handle/123456789/6058 | |
dc.description | Tesis (Maestría en Ciencias en Biosistemática y Manejo de Recursos de Naturales y Agrícolas). Universidad de Guadalajara. CUCBA. | |
dc.description.abstract | Existen diversas investigaciones que demuestran que Salmonella enterica puede contaminar e internalizarse en el tomate durante el cultivo de la planta, fruto o lavado; siendo los serotipos de Newport y Montevideo los más adaptados para permanecer en el interior del fruto, y Saintpaul en la superficie del tomate. Poco se sabe al respecto de las dinámicas de interacción de Salmonella Newport, Saintpaul y Montevideo cuando se encuentra internalizada en el tomate y por las características intrínsecas del fruto, el gen de estrés rpoS pudiera estar implicado en la internalización bacteriana. Los resultados obtenidos en esta investigación evidencian que la internalización de Salmonella Newport, Saintpaul y Montevideo ocurre en los tomates cherry cuando hay un gradiente de temperatura de 12 ºC, donde la cantidad de células internalizadas es dependiente del serotipo y el tiempo de incubación (p < 0.05). En contraste, en los experimentos realizados con tomates higienizados con hipoclorito de sodio no se observó recuperación en placa de las bacterias internalizadas. Sin embargo, no se descarta la posibilidad de que Salmonella exista en el fruto en un estado de viable no cultivable, debido a que hay reportes que demuestran que el hipoclorito de sodio causa estrés en las células bacterianas. Nuestros resultados de qRTPCR múltiple muestran la disminución de la transcripción de rpoS de Salmonella Newport, Saintpaul y Montevideo en el interior del tomate, en comparación a la registrada bajo una condición de inducción del gen in vitro (p < 0.05). La disminución de la transcripción de rpoS en el tomate sugiere que el fruto no representa una condición de estrés para la bacteria. | |
dc.description.tableofcontents | Dedicatoria............................................................................................................................ III Agradecimientos ................................................................................................................... IV Lista de figuras ............................................................................................................ ……VII Lista de cuadros ................................................................................................................. VIII Abreviaturas.......................................................................................................................... IX Resumen ................................................................................................................................ X Abstract ................................................................................................................................. XI 1. Introducción ........................................................................................................................ 1 2. Antecedentes ....................................................................................................................... 3 2.1 Características generales de Salmonella ....................................................................... 3 2.1.1 Nomenclatura y clasificación de Salmonella...................................................... 5 2.1.2 Patogenicidad de Salmonella .............................................................................. 6 2.1.3 Mecanismo de supervivencia y adaptación de Salmonella. ................................ 8 2.2 Salmonella y enfermedades transmitidas por el consumo de tomates........................ 11 2.3 Interacción entre Salmonella la planta y el fruto de tomate ........................................ 14 2.3.1 Internalización de Salmonella en el tomate ....................................................... 18 3. Planteamiento del problema y justificación...................................................................... 19 4. Hipótesis .......................................................................................................................... 20 5. Objetivos .......................................................................................................................... 21 5.1 Objetivo general ......................................................................................................... 21 5.2 Objetivos específicos .................................................................................................. 21 6. Materiales y Métodos ...................................................................................................... 22 6.1 Cepas de trabajo........................................................................................................... 22 6.2 Determinación de parámetros de pH y grados Brix en los tomates cherry utilizados durante la investigación ............................................................................................... 22 6.3 Preparación del inóculo ............................................................................................... 23 6.4 Inoculación de los tomates cherry con Salmonella Newport, Saintpaul o Montevideo .................................................................................................................. 23 6.5 Recuperación de células internalizadas en los tomates cherry ..................................... 23 6.6 Recuperación de células internalizadas en los tomates cherry higienizados con hipoclorito de sodio ..................................................................................................... 24 6.7 Obtención de células internalizadas en el tomate cherry para la purificación de RNA de Salmonella ............................................................................................................. 25 6.8 Purificación del RNA de las células internalizadas de Salmonella ............................ 25 6.9 Tratamiento del RNA de Salmonella con DNAsa ....................................................... 26 6.10 Síntesis de cDNA y PCR tiempo real ........................................................................ 26 6.11 Análisis estadístico .................................................................................................... 27 7. Resultados y discusión...................................................................................................... 28 7.1 Estandarización de la inoculación y recuperación de Salmonella Internalizada en el tomate cherry ............................................................................................................... 28 7.2 Internalización de Salmonella Newport en el tomate cherry ....................................... 30 7.3 Recuperación de Salmonella Newport internalizadas en tomate cherry sometidas a un proceso de higienización con hipoclorito de sodio ...................................................... 32 7.4 Internalización de Salmonella Saintpaul en el tomate cherry...................................... 33 7.5 Internalización de Salmonella Montevideo en el tomate cherry ................................. 35 7.6 Comparación de la supervivencia de Salmonella Newport, Saintpaul y Montevideo internalizadas en tomates cherry................................................................................. 37 7.7 Determinación de parámetros de pH y grados Brix en los tomates utilizados durante la investigación ................................................................................................................ 40 7.8 Cuantificación de la expresión relativa del gen rpoS de Salmonella Newport, Saintpaul y Montevideo. ............................................................................................. 41 8. Conclusiones. .................................................................................................................... 45 9. Literatura citada. ............................................................................................................... 46 Anexos .................................................................................................................................. 58 Anexo A. Evaluación de la descontaminación de la superficie de los tomates cherry en etanol al 70 ó 96%. .............................................................................................. 59 Anexo B. Reactivos para la preparación de Luria de Bertani (LB) ..................................... 61 Anexo C. Preparación de rifampicina................................................................................... 62 Anexo D. Preparación del inoculo con hipoclorito de sodio ................................................ 63 Anexo E. Protección del RNA del paquete celular con RNAprotect (QIAGEN) ............... 64 Anexo F. Protocolo para la purificación del RNA con el kit RNeasy Mini Kit (QIAGEN)……………………………………………………………………….65 Anexo G. Protocolo para el tratamiento de RNA ................................................................. 66 Anexo H. Protocolo para PCR tiempo final ......................................................................... 67 Anexo I. Protocolo para retrotranscripción con el kit GoScript Reverse Transcription System (Promega) ............................................................................................... 68 Anexo J. Protocolo para PCR tiempo real ........................................................................... 69 | |
dc.format | application/PDF | |
dc.language.iso | es | |
dc.publisher | CUCBA | |
dc.publisher | Universidad de Guadalajara | |
dc.subject | Salmonella enterica, serotipos, hipoclorito de sodio. | |
dc.title | Dinámicas de internalización de Salmonella Newport, Saintpaul y Montevideo en tomates cherry (Solanum lycopersicum var. Cerasiforme) higienizados con hipoclorito de sodio. | |
dc.type | Maestría | |
dc.type | Tesis | |
dc.rights.holder | Universidad de Guadalajara | |
dc.rights.holder | Orozco García Adriana Guadalupe |