Variación somaclonal en embriones somáticos de Agave tequilana Weber Cultivar Azul

Abstract

La biotecnología vegetal tiene como finalidad, aprovechar todas aquellas características agronómicas útiles que pueden ocurrir eventualmente en el cultivo de tejidos vegetales; para ello fue conveniente aplicar en este estudio, la regeneración de plantas del “maguey tequilero” (Agave tequilana Weber cultivar azul) vía embriogénesis somáticas se siguió la metodología ya implementada previamente, ya que se deben utilizar como explantes segmentos de raíz de plantas previamente establecidas, a fin de producir callos, dichos explantes fueron obtenidos de plantas micropropagadas mediante proliferación de yemas axilares, en medio MS. Se emplearon dos tratamientos; el primero con 2.0 mg L-1 de ácido 2,4-diclorofenoxiacético (2,4-D), 0.3 mg L-1 de benciladenina (BA). El segundo con 3 mg L-1 de 2,4-D, 2 mg L-1 de ácido naftaleneacético (ANA) y 2 mg L-1de cinetina (KIN). En ambos tratamientos se produjo baja inducción de callo, el cual fue de apariencia friable, con características estructurales de callos embriogénicos. Con la finalidad de diferenciar células embriogénicas se aplicó una contratinción para ubicar células con división asimétrica. La expresión de embriones somáticos se hizo en ausencia de reguladores de crecimiento con base en dos experimentos, el primero en un sistema de inmersión temporal Orbitabion® y el segundo en medio sólido, ambos con 40 u 80 mg L-1 de adenina y 500 mg L-1 de hidrolizado de caseína. Se encontró que el número de embriones fue más evidente en el medio líquido que en medio sólido. A partir de 100 d de cultivo se obtuvieron plántulas completas y para evaluar su homogeneidad genética se utilizó la técnica de RAPD (polimorfismo de ADN amplificado aleatoriamente). La amplificación se hizo a partir de la combinación de nueve iniciadores de la serie Amersham® yOperon® en un volumen final de reacción de 25 µL. Los resultados obtenidos mostraron 229 bandas diferenciales, entre 50 y 1000 pares de bases, de las cuales 69 fueron monomórficas y 169 polimórficas. El dendrograma obtenido basado en el coeficiente de similitud de Jaccard permitió revelar la variación somaclonal existente, la cual se detectó con polimorfismos entre 33 a 90 %, con un coeficiente de similitud entre 16 a 50 %. Asimismo se obtuvo la diferenciación entre grupos, donde se confirmó la existencia de diferencias genéticas entre los somaclones originados vía embriogénesis somática, así como con la planta madre de la cual procedieron, que se agruparon de acuerdo al nivel de discrepancia por su origen en dos sistemas de expresión (Orbitabión® y medio sólido). Las plantas regeneradas tuvieron una adaptación ex vitro exitosa lo que valida el proceso de embriogénesis somática en esta especie.